HINRs 技术登场,开启真菌病原体检测高效新时代
发布时间:2025-04-22 浏览次数:16 分享:
在人类与微生物的漫长 “斗争” 中,真菌性感染一直是棘手难题。真菌性感染不仅潜伏期长,而且常作为并发症出现,给早期诊断和治疗带来极大挑战。传统的检测方法,如血液培养、组织活检和成像技术,都存在耗时久、准确性欠佳或不适用于早期诊断的问题。分子生物学检测虽有潜力,但真菌复杂的细胞结构使得 DNA 提取困难重重,现有提取方法效率低、易受污染,严重影响检测的准确性和及时性。
近期,韩国研究团队在《Sensors & Actuators: B. Chemical》杂志发表了一项重要研究成果,为这一难题提供了创新解决方案。他们开发了一种基于修饰氧化锌纳米稻(HINRs)的便捷 DNA 提取方法,能够快速从真菌孢子中提取 DNA,大幅提升了真菌病原体检测效率。
研究人员通过温和可控的水热碱性法合成了氧化锌纳米稻(ZnO NRs),并使用二甲基辛二亚氨酸酯(DMS)对其进行表面修饰,成功制备出 HINRs。这种材料呈均匀的稻粒状,表面修饰增强了它在溶液中的分散性,使其能更有效地捕获真菌孢子和核酸。
HINRs 的优势体现在多个方面。在核酸提取过程中,它集细胞裂解、核酸富集和提取功能于一体,操作简便,仅需 12 分钟就能完成,且无需复杂设备和高盐有机溶剂,降低了成本,提高了核酸纯度。HINRs 在室温下保存 2 年,稳定性仍超 95%,远超传统方法和商业试剂盒。在性能测试中,HINRs 展现出卓越的提取能力。对比 ZnO 纳米花(ZnO NFs)和 ZnO NRs,HINRs 对真菌孢子的裂解和核酸提取效果最佳,其独特结构使其能更好地分散在溶液中,与孢子充分接触。研究人员进一步优化了 HINRs 的使用浓度、洗脱缓冲液 pH 值等条件,确定了最佳实验参数。
图 1:展示 HINRs 核酸提取方法的流程及原理,对比 ZnO NFs、ZnO NRs 和 HINRs 与真菌孢子作用的 SEM 图像,体现 HINRs 在穿透真菌屏障、收集 DNA 及覆盖孢子表面的优势。
在实际应用方面,HINRs 表现出色。在临床样本检测中,无论是人工感染的小鼠肺组织样本,还是患者的痰液样本,HINRs 都能快速准确地检测出真菌 DNA。在痰液样本检测中,它能在两小时内完成遗传物质收集和基因扩增检测,检测结果与临床报告高度吻合。在日常产品检测中,如血液、果汁、牛奶等,HINRs 也展现出强大的检测能力。尽管在牛奶等高蛋白、高脂肪样本中,低浓度孢子检测会受到一定干扰,但在其他样本中,其检测灵敏度和稳定性都优于商业试剂盒。
图 2:通过 UV - Vis 光谱、FTIR 光谱、Zeta 电位、XRD 分析、氮吸附 - 脱附等温线和 TGA 等手段,对 ZnO NFs、ZnO NRs 和 HINRs 的组成、结构、表面性质等进行表征,以探究材料特性。
图 3:以电泳条带强度代表扩增 DNA 量,比较 ZnO NFs、ZnO NRs 和 HINRs 对真菌孢子核酸的提取效果,优化 HINRs 应用条件并测试其稳定性和准确性。
图 4:在血液、牛奶、果汁等多种日常产品中,对比 HINRs 方法、ZnO + HI 方法和商业试剂盒对真菌孢子的检测效果,凸显 HINRs 在不同溶液中的检测优势。
图 5:运用 HINRs 方法对人工感染的小鼠肺组织和患者痰液样本进行曲霉感染检测,展示其在临床样本检测中的有效性和高灵敏度。
与商业试剂盒相比,HINRs 方法具有显著优势。它的提取灵敏度比部分商业试剂盒高两个数量级,尤其在高浓度样本提取时表现突出,且提取稳定性更好。在不同真菌浓度样本的检测中,HINRs 提取的 DNA 产量更高,纯度更稳定,受杂质污染的影响更小。
这项研究成果意义重大,HINRs 方法为真菌性感染的早期诊断提供了快速、准确的检测手段,有望广泛应用于临床诊断和日常检测场景。研究团队表示,未来将进一步优化 HINRs 试剂的用量和过滤膜等条件,探索其他辅助材料对检测结果的影响,以推动该技术的实际应用和发展,为全球抗击真菌性感染提供有力支持。
参考文献:Liu H, Lim S M, Zhang K, et al. Efficient handy DNA Extraction from Fungal Spores Using Modified ZnO Nano-Rices for Rapid Pathogen Detection[J]. Sensors and Actuators B: Chemical, 2025: 137409.
来源:微生物安全与健康网,作者~王鑫。